一、
實時熒光定量PCR檢測服務的用途：
1、基因表達研究：對β地中海貧血癥患者β與γ珠蛋白mRNA水平進行檢測，其結果特異性強、定量準確，為了解β地中海貧血的分子病理機制及其研究診斷提供了可靠的檢測數(shù)據(jù)。
2、轉基因研究：利用兩種發(fā)光探針及適當?shù)难h(huán)閾值，擴增一個轉移后的基因和一個對照基因，以分析轉基因老鼠接合性。
3、該方法為多個轉基因動物的同型結合及異質結合提供了明確的鑒定結果。通過實時定量PCR檢測，同型結合的異質接合動物交配后其子代中轉基因的傳遞情況符合孟德爾遺傳規(guī)律。
4、這項技術在轉基因動物繁育及基因劑量功能效應實驗中將有很大的用途。
5、單核苷酸多態(tài)性及突變分析：實時熒光定量PCR一個誘人的應用前景是用于檢測基于兩條探針和基因組的不穩(wěn)定性。
6、基因突變基于兩條探針，一條探針橫跨突變點，另一條為錨定探針，與無突變位點的靶序列雜交。兩條探針用兩種不同的發(fā)光基團標記。
7、如靶序列中無突變，探針雜交便*配對，如有突變，則探針與靶序列不*配對，會降低雜交體得穩(wěn)定性，從而降低其熔解溫度。這樣便可對突變和多態(tài)性進行分析。
二、實時熒光定量PCR檢測服務的常見問題：
1、引物或探針降解：可通過PAGE電泳檢測其完整性。
2、模板量不足：對未知濃度的樣品應從系列稀釋樣本的濃度做起。
3、模板降解：避免樣品制備中雜質的引入及反復凍融的情況。
4、擴增效率低:反應條件不夠優(yōu)化，設計更好的引物或探針、改用三步法進行反應、適當降低退火溫度、增加鎂離子濃度等。
5、PCR各種反應成分的降解或加樣量不足。
6、PCR產(chǎn)物太長：一般采用標準的產(chǎn)物長度。
7、加樣存在誤差：使得標準品不呈梯度。
8、標準品出現(xiàn)降解：應避免標準品反復凍融，或重新制備并稀釋標準品。
9、引物或探針不佳：重新設計更好的引物和探針。
10、模板中存在抑制物，或模板濃度過高。
11、引物設計不夠優(yōu)化：應避免引物二聚體和發(fā)夾結構的出現(xiàn)。
12、引物濃度不佳：適當降低引物的濃度，并注意上下游引物的濃度配比。
13、鎂離子濃度過高：適當降低鎂離子濃度，或選擇更合適的mix試劑盒。
14、模板有基因組的污染：RNA提取過程中避免基因組DNA的引入，或通過引物設計避免非特異擴增。
總結：實時熒光定量PCR檢測服務的用途及常見問題小編就分享到這了，看完本文您就應該有了基本的認識和了解相信大家都明白了吧！總的來說，希望對大家有所幫助。
更新時間：2020-12-22 
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