1、此染色液即為工作液,使用時直接將聚丙烯酰胺凝膠放在培養(yǎng)皿中以考馬斯亮藍染色液覆蓋凝膠,并緩慢搖動2h;
2、傾去染色液,用脫色液沖洗凝膠;
3、以脫色液覆蓋凝膠,緩慢搖動2h,傾去脫色液,再加入新脫色液進行脫色,直至獲得清晰的藍色的條帶和干凈的背景(通常此過程需要2~4h,也可脫色過夜至清晰的藍色的條帶和干凈的背景);
4、對凝膠進行分析和照相,凝膠可放置在7%的乙酸中保存。也可用凝膠干膠裝置(P2000)對凝膠進行處理后保存。安全性:含有甲醇,無特殊毒性,按一般化學品操作規(guī)程處理。
明膠酶譜法試劑盒的使用注意事項:
1、制備聚丙烯酰胺時應注意排除氣泡。
2、明膠酶譜的活性受鈣離子,鋅離子,和PH值等因素的影響,因此緩沖液配制應嚴格準確,盡量用超純水,孵育溫度也掌握好。
3、用大梳子。
4、孵育液的PH在7.5-7.6,復性的TRITON時間長了會有絮狀物,所以實驗時盡量使用新鮮配置的。
5、孵育的37度不要在CO2培養(yǎng)箱中,因為會改變孵育液的PH值,在普通孵箱即可。
6、細胞樣本用PBS5倍體積震蕩裂解,估算細胞的體積,然后加入5倍體積的PBS,渦旋振蕩15-30s,而后靜置或低速離心或者手動震蕩。