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堿性磷酸酶顯色試劑盒檢測原理

更新時(shí)間:2025-03-04      瀏覽次數(shù):172
堿性磷酸酶顯色試劑盒檢測原理
產(chǎn)品描述:
本試劑盒應(yīng)用于胚胎干細(xì)胞(ES)和誘導(dǎo)多功能干細(xì)胞(iPS)的鑒定,以及免疫組化、免疫印跡等實(shí)驗(yàn)中的堿性磷酸酶顯色。試劑盒內(nèi)的5-溴-4-氯-3-吲哚磷酸鹽(BCIP)/硝基四氮唑藍(lán)(NBT)是堿性磷酸酶(AP)的常用底物之一,BCIP在AP的催化下會被水解生成強(qiáng)反應(yīng)性產(chǎn)物,后者與硝基四氮唑藍(lán)(NBT)反應(yīng)生成不溶性產(chǎn)物,使之呈現(xiàn)深藍(lán)色至藍(lán)紫色。
操作指南:
1. AP顯色工作液的配制:
取20μl 150×NBT溶液加入到3ml堿性磷酸酶顯色反應(yīng)緩沖液,充分混合均勻,再加入30μl 100×BCIP溶液,配置成工作液,如需改變工作液體積,可按相同比例適量配制。1h內(nèi)使用。
2.  顯色步驟:
a)  檢測細(xì)胞的內(nèi)源性堿性磷酸酶:吸出培養(yǎng)基,PBS潤洗3次,加入4%多聚甲醛固定1-2min。吸出固定液,使用TBST清洗三次,加入顯色工作液,室溫避光孵育5-30分鐘,顯色至預(yù)期深淺后,用PBS潤洗1次,然后保存于PBS溶液中,顯微鏡下觀察結(jié)果。
b)  檢測組織切片或膜上結(jié)合的堿性磷酸酶抗體:使用洗滌液洗滌完后,加入適量工作液,保證完-全覆蓋樣品表面,室溫避光孵育5-30分鐘,顯色至預(yù)期深淺后,去除工作液,用蒸餾水清洗1-2次終止顯色反應(yīng)。
注意事項(xiàng):
工作液應(yīng)現(xiàn)配現(xiàn)用,配制好的工作液在一定時(shí)間內(nèi)有效。
使用NBT時(shí)請采取必要的防護(hù)措施。
工作液用量必需充足,保證覆蓋組織片或印跡膜。
為獲得最佳實(shí)驗(yàn)結(jié)果,請務(wù)必優(yōu)化如樣品使用量、抗體稀釋度、孵育時(shí)間等實(shí)驗(yàn)條件。
綜上所述,BCIP/NBT堿性磷酸酶顯色試劑盒是一種功能強(qiáng)大、應(yīng)用廣泛的科研工具,能夠幫助科研工作者準(zhǔn)確、快速地檢測和分析堿性磷酸酶的活性。




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