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ELISA方法 捕獲HCMV pp65特異性IgM抗體檢測(cè)病毒活動(dòng)性感染

更新時(shí)間:2013-08-28      瀏覽次數(shù):1291

  建立ELISA抗體捕獲法用于檢測(cè)HCMVpp65特異性IgM,以確定感染狀態(tài),為HCMV活動(dòng)性感染診斷試劑盒的研發(fā)提供理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法:將HCMVAD169株感染HF細(xì)胞,粗提HCMV抗原;通過(guò)SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳(PAGE)和Western-blotting篩選出HCMVpp65抗原,測(cè)定pp65抗原效價(jià)及其和特異性抗體的親和力:用辣根過(guò)氧化物酶(HRP)標(biāo)記HCMVpp65單克隆抗體(McAb)。通過(guò)抗人μ鏈包被微量滴定板,先后加待檢血清和pp65抗原-酶標(biāo)McAb復(fù)合物,建立ELISA捕獲HCMVpp65特異性IgM抗體方法學(xué)。用該法檢測(cè)30份兒童、30份孕婦和28份免疫缺陷者的研究血清樣本,并用DIESSE公司酶免疫HCMV IgM檢測(cè)試劑盒同步檢測(cè)。結(jié)果:制備的HCMV-pp65抗原PAGE膠上位于65KD Marker處,呈單一條帶,抗原效價(jià)為1:100;HRP-MCAb免疫雙擴(kuò)效價(jià)為1:32;檢測(cè)系統(tǒng)各反應(yīng)物的*稀釋度為抗人μ鏈0. 75μg/孔,待檢血清為1:100,HCMV抗原為1:100,HRP-McAb 1:20:兩種方法的各組陽(yáng)性率分別為6. 7%、13. 3%、10. 7%和10%、13. 3%、14. 3%,總符合率為91%。結(jié)論:建立了簡(jiǎn)便、快捷、特異性和敏感性均較高的ELISA捕獲HCMV pp65特異性IgM抗體法,其檢測(cè)結(jié)果與DIESSE公司酶免疫HCMV IgM檢測(cè)試劑盒的總符合率為91%。可用于兒章、孕婦和免疫力低下者,診斷HCMV活動(dòng)性感染。

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