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上海信帆生物:紫外分光光度法測定蛋白質(zhì)含量

更新時間:2016-04-27      瀏覽次數(shù):1108

考馬斯亮蘭G250與蛋白質(zhì)結(jié)合,在0-1000ug/ml范圍內(nèi),于波長595nm處的吸光度與蛋白質(zhì)含量成正比,可用于蛋白質(zhì)含量的測定??捡R斯亮蘭G250與蛋白質(zhì)結(jié)合迅速,結(jié)合產(chǎn)物在室溫下10分鐘內(nèi)較為穩(wěn)定,是一種較好的蛋白質(zhì)定量測定方法。

1. 實驗部分
1.1 儀器與試劑:
Labtech UV POWER紫外分光光度計;玻璃比色皿一套;考馬斯亮藍(lán)G250;
牛血清蛋白;超純水。
1.2 試液的制備:
牛血清蛋白標(biāo)準(zhǔn)溶液(1000ug/ml)的制備 稱取100mg牛血清蛋白置100ml容量瓶中,加入超純水溶解并定容。
考馬斯亮蘭G250試劑 稱取100mg考馬斯亮蘭G250,溶于50ml95%的乙醇后,加入120ml85%的磷酸,用水稀釋至1升。

2. 結(jié)果與討論
2.1 校正曲線的繪制
準(zhǔn)確吸取1000ug/ml牛血清蛋白標(biāo)準(zhǔn)溶液0.0、0.02、0.04、0.06、0.08、0.1ml分別加入到6只10ml試管中,然后用超純水補充到0.1ml,各試管分別加入5ml考馬斯亮蘭G250試劑,混合均勻后,即可依次在595nm處測定吸光度。以濃度
為橫坐標(biāo),吸光度為縱坐標(biāo)繪制校正曲線如下圖,校正曲線方程為A=0.613556C+0.001008,R=0.9994。

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