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產(chǎn)品分類TECHNICAL ARTICLES
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重組型TEV蛋白酶（rTEV）是經(jīng)過(guò)基因工程改造和純化后的重組蛋白酶，不僅保持天然TEV酶的功能活性，且在廣譜的溫度范圍內(nèi)表現(xiàn)出更好的穩(wěn)定性和特異性。rTEV是一種用來(lái)切除融合蛋白上親和標(biāo)簽的常用工具酶，具有很強(qiáng)的位點(diǎn)特異性，rTEV Protease重組煙草蝕紋病毒蛋白酶
產(chǎn)品型號(hào)：廠商性質(zhì)：生產(chǎn)廠家更新時(shí)間：2024-10-21訪 問(wèn) 量：758
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rTEV Protease重組煙草蝕紋病毒蛋白酶
產(chǎn)品描述
重組型TEV蛋白酶（rTEV）是經(jīng)過(guò)基因工程改造和純化后的重組蛋白酶，不僅保持天然TEV酶的功能活性，且在廣譜的溫度范圍內(nèi)表現(xiàn)出更好的穩(wěn)定性和特異性。rTEV是一種用來(lái)切除融合蛋白上親和標(biāo)簽的常用工具酶，具有很強(qiáng)的位點(diǎn)特異性，嚴(yán)格識(shí)別七氨基酸序列EXXYXQ↓(G/S)，切割位點(diǎn)在谷氨酰胺和甘氨酸/絲氨酸之間。普遍應(yīng)用的七氨基酸序列為：Glu-Asn-Leu-Tyr-Phe-Gln↓-Gly。rTEV在pH 7.0，30°C時(shí)可達(dá)到*活性，但在pH 6.0-8.5和溫度4-30°C的廣泛范圍內(nèi)皆有活性（見(jiàn)表1），使得反應(yīng)條件的選擇可根據(jù)目的蛋白的情況而靈活變動(dòng)。另外rTEV切割后也能利用其N端的 6×His標(biāo)簽，通過(guò)Ni-NTA樹(shù)脂去除，以達(dá)到純化目的蛋白的目的。
表1. 不同溫度下rTEV酶切活性
反應(yīng)時(shí)間 | 不同溫度下剪切活性(%) | |||
4°C | 16°C | 21°C | 30°C | |
1 h | 34 | 58 | 56 | 70 |
2 h | 58 | 80 | 78 | 90 |
3 h | 71 | 99 | 99 | 99 |
3.5h | 84 | 99 | 99 | 99 |
影響天然TEV酶活性的常見(jiàn)因素：1）PMSF和AEBSF（1 mM），TLCK（1 mM），Bestatin（1 mg/ml）、Pestatin A（1 mM），EDTA（1 mM）以及E-64（3 mg/ml），以上這些蛋白酶抑制劑對(duì)rTEV的活性沒(méi)有影響；2）Zn離子（＞5 mM）對(duì)rTEV活性有抑制；3）與半胱氨酸反應(yīng)的試劑也是rTEV的潛在抑制劑。
rTEV Protease重組煙草蝕紋病毒蛋白酶
產(chǎn)品性質(zhì)
來(lái)源（Source） | 大腸桿菌 |
外觀（Appearance） | 無(wú)色透明液體 |
比活力（Specific Activity） | 5 U/μl |
活性定義（Unit Definition） | 在1×rTEV Buffer（50 mM Tris，pH8.0，0.5 mM EDTA，1mM DTT）中，30℃反應(yīng)1h，剪切>85%的3 μg底物所需要的酶量定義為一個(gè)活性單位。 |
純化（Purification ） | Ni親和純化 |
純度（Purity） | ≥95%（by SDS-PAGE） |
產(chǎn)品組分
編號(hào) | 組分名稱 | 規(guī)格 | |||
1000U | 10×1000U | 10KU | 50KU | ||
20403-A | rTEV Protease（5 U/μl） | 200 μl | 200 μl×10 | 2ml | 10ml |
20403-B | rTEV Buffer 1（20×） | 2 ml | 2 ml×10 | 20ml | 100ml |
20403-C | rTEV Buffer 2（1000×） | 50μl | 50μl×10 | 500μl | 2.5ml |
運(yùn)輸與保存方法
冰袋（wet ice）運(yùn)輸。
收到產(chǎn)品后，請(qǐng)將rTEV Buffer 1、rTEV Buffer 2置于-20 ºC保存，一年穩(wěn)定。對(duì)于rTEV Protease，短期使用，可置于-20 ºC保存，6個(gè)月穩(wěn)定；長(zhǎng)期使用，請(qǐng)置于-70℃保存，一年穩(wěn)定。強(qiáng)烈建議收到貨或者*次使用時(shí)將各組分分裝保存，特別是rTEV Protease，以及rTEV Buffer 2（1000×），避免反復(fù)凍融。
應(yīng)用實(shí)例
融合蛋白 | 20 μg |
rTEV Protease (5 U/μl) | 2-4μl |
rTEV buffer 1（20×） | 7.5 μl |
rTEV Buffer 2（100×）* | 1.5μl |
DDW（超純水） | up to 150 μl |
【*】：取適量的rTEV Buffer 2（1000×）做10倍稀釋到rTEV Buffer 2（100×），再根據(jù)以上體系加量。
2. 30℃孵育，在1、2、4、6小時(shí)分別吸出30 μl上述反應(yīng)液，置于單獨(dú)的EP管中。
3. 向上述EP管中加入30 μl 2×SDS Loading Buffer，置于-20℃。
4. 樣品全部反應(yīng)完畢后，樣品煮沸5 min，取40 μl進(jìn)行SDS-PAGE分析。確定*反應(yīng)時(shí)間。如融合蛋白要求低溫處理，可將反應(yīng)液置于4℃，請(qǐng)延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間，并增加rTEV酶用量。
注意事項(xiàng)
為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
郵箱：1170233632@qq.com
傳真：021-51870610
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