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產(chǎn)品分類TECHNICAL ARTICLES
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鎳瓊脂糖凝膠 Ni(NTA)英文名稱:Ni Berpharose FF-NTA貨號(hào):B2776規(guī)格:1套本產(chǎn)品僅供科研實(shí)驗(yàn)用,不做其它用途!
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鎳瓊脂糖凝膠 Ni(NTA)
英文名稱:Ni Berpharose FF-NTA
貨號(hào):B2776
1. 產(chǎn)品介紹
鎳-瓊脂糖凝膠FF(NTA)以瓊脂糖微球?yàn)榛|(zhì),活化偶聯(lián)次氮基三乙酸(NTA),之后螯合Ni2+。鎳-瓊脂糖凝膠FF(NTA)主要用于分離能被金屬離子吸附的多肽、蛋白、核苷酸、磷酸化蛋白及帶 His標(biāo)簽的重組蛋白。
鎳 NTA瓊脂糖凝膠 FF具特異性好,螯合鎳更穩(wěn)定,不易脫落,能耐受一定強(qiáng)度的還原劑,物理和化學(xué)穩(wěn)定性好。
2.規(guī)格
1ml(預(yù)裝柱)、5ml(預(yù)裝柱)、10ml(預(yù)裝柱)、20ml、100ml、500ml
3.產(chǎn)品性能
性能
指標(biāo)
基質(zhì)
6%瓊脂糖微球
配基
Ni2+
載量
≥40mg His標(biāo)簽蛋白/ml
粒徑
45-165μm
建議流速
50-300 cm/h
耐壓
0.3MPa
工作溫度
4-40℃
pH穩(wěn)定范圍
3-10
儲(chǔ)存緩沖液
20%乙醇
儲(chǔ)存溫度
4-8℃
4.純化流程
①平衡
鎳-瓊脂糖凝膠FF柱用2-5個(gè)柱體積的初始緩沖溶液進(jìn)行平衡。
建議流速為100 cm/h。
②上樣
(1)樣品一般溶解于pH6-8的初始緩沖液中。提高上樣緩沖液的pH值可以增大載量。
(2)常用緩沖液有10-100 mM磷酸鈉緩沖液、20-200 mM Tris-HCl緩沖液等。
(3)緩沖液中一般要加入0.15-0.5 M的NaCl以消除離子交換作用。
(4)初次使用鎳-瓊脂糖凝膠FF時(shí),推薦使用50 mM PBS(50 mM NaH2PO4、0.3 M NaCl、pH 8.0)作為初始緩沖液。
③洗脫
(1)增加咪唑濃度進(jìn)行洗脫是鎳-瓊脂糖凝膠FF最-常-用的洗脫方法。
(2)咪唑?yàn)閴A性,相應(yīng)緩沖液配制后需要用HCl調(diào)節(jié)pH值。
(3)初次使用鎳-瓊脂糖凝膠FF時(shí),如不確定洗脫需要的咪唑濃度,推薦在初始緩沖液中分別加入10 mM、20 mM、50 mM、100 mM、200 mM、500 mM咪唑,濃度從低
到高分別洗脫和收集重組蛋白,之后通過(guò)SDS-PAGE電泳等方法鑒定洗脫結(jié)果。
(4)有條件的可以進(jìn)行咪唑梯度線性洗脫以確定較佳的洗脫條件。
洗脫方法:
(1)降低pH洗脫:大多數(shù)蛋白在pH4-6會(huì)被洗脫下來(lái)(也可以在pH 3~4),緩沖液可以是醋酸鈉、檸檬酸和磷酸鹽緩沖體系。
(2)競(jìng)爭(zhēng)性洗脫:線性增加或一步增加同金屬離子有親和力的競(jìng)爭(zhēng)物質(zhì)的濃度(如0-0.5M咪唑、0-50 mM組-氨酸、0-2M NH4Cl)。梯度洗脫最好在起始緩沖液的恒定pH值下進(jìn)行。
5.在位清洗
(1)去除因離子交換作用吸附的蛋白:使用1.5M NaCl溶液接觸時(shí)間為10-15分鐘清洗,然后,再使用去離子水清洗10個(gè)柱體積。
(2)去除強(qiáng)疏水性蛋白和脂質(zhì)等:通過(guò)使用30%異丙醇清洗5-10個(gè)柱體積,接觸時(shí)間為15-20分鐘可以去除此類污染物。
然后,再使用10倍柱體積的去離子水清洗。也可以選擇使用含有去污劑的酸性或堿性溶液, 清洗填料2倍柱體積。例如,含有0.1–0.5% 非離子去污劑的0.1 M 醋酸溶液,接觸時(shí)間 為1–2 小時(shí)。去污劑處理后,需要使用70%的乙醇清洗5個(gè)柱體積,以徹-底去除去污劑。 最后使用10倍柱體積的去離子水清洗。
5.注意事項(xiàng):
1)使用時(shí)保證柱子和緩沖液的溫度一致,避免柱床內(nèi)產(chǎn)生氣泡,影響純化效果。
2)本產(chǎn)品保存條件為20%乙醇,4-8℃。
3) 2-25℃,常壓,避光運(yùn)輸。
4)僅供科研實(shí)驗(yàn)使用。
鎳瓊脂糖凝膠 Ni(NTA)
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